Окраска мазков на малярию

Содержание
  1. Малярия
  2. Что это такое?
  3. Как можно заразиться?
  4. Малярия на губах
  5. Симптомы малярии у человека
  6. Осложнения
  7. Диагностика
  8. Как лечить малярию?
  9. Профилактика
  10. Разработка вакцин от малярии
  11. Исследование на малярию
  12. Что такое малярия?
  13. Виды плазмодий
  14. Симптомы малярии
  15. Диагностические исследования малярии
  16. Общий анализ крови
  17. Другие анализы
  18. Анализ толстой капли крови и мазка
  19. Бактериальные краски
  20. Приготовление красителя
  21. Методика окраски
  22. Окраска плазмодиев малярии в мазках по Романовскому-Гимза
  23. Методика окраски «толстой капли»
  24. Дифференцированная окраска кислотоустойчивых бактерий (микобактерии туберкулеза и лепры)
  25. Метод Френкеля
  26. Флюоресцентное окрашивание мазков мокроты (метод Хагеманна) ,
  27. Метод Киньуна (для срезов)
  28. Метод Файта (для срезов)
  29. Серебрение бактерий в мазках — метод Фонтана
  30. Метод Леффлера
  31. Метод Лайфзона
  32. Метод Клетта
  33. Метод Джоне
  34. Метод Фридлендера (для срезов)
  35. Метод Бурри
  36. Метод Гинса
  37. Выявление спор бактерий
  38. Метод Вайсера—Хьюппе
  39. Лабораторные методы диагностики малярии
  40. Диагностика малярии с использованием микроскопического метода
  41. Техника приготовления «толстой» капли
  42. Порог обнаружения паразитов
  43. Формы малярийных плазмодиев в разные фазы развития
  44. Контроль эффективности лечения
  45. Кратность проведения исследования
  46. Иммунологические методы диагностики малярии
  47. Дифференциальная диагностика малярии
  48. Вопрос 61. Лабораторная диагностика малярии
  49. 4. Исследование комаров на зараженность малярийными паразитами

Малярия

Окраска мазков на малярию

Симптомы малярии, лечение и правила профилактики
Малярия, известная также под названиями «болотная лихорадка», «перемежающаяся лихорадка», «пароксизмальная малярия», острое инфекционное заболевание, вызываемое несколькими видами простейших рода Plasmodium и передаваемое при укусе комара рода Anopheles. Для малярии характерны повторяющиеся приступы сильного озноба, высокой температуры и обильного пота.

Она широко распространена в теплых и влажных регионах со среднегодовой температурой 16° С и выше, встречается также в зонах более умеренного климата и совсем отсутствует в приполярных областях. Заболевание наносит серьезный экономический ущерб странам с тропическим и субтропическим климатом, лидируя среди всех заболеваний как основная причина нетрудоспособности и смертности населения.

Что это такое?

Малярия (Средние века итал.

mala aria — «плохой воздух», ранее известная как «болотная лихорадка») — группа трансмиссивных инфекционных заболеваний, передаваемых человеку при укусах самками комаров рода Anopheles («малярийных комаров») и сопровождающихся лихорадкой, ознобами, спленомегалией (увеличением размеров селезёнки), гепатомегалией (увеличением размеров печени), анемией. Характеризуется хроническим рецидивирующим течением. Вызывается паразитическими протистами рода Plasmodium (80—90 % случаев — Plasmodium falciparum).

На начало XXI века заболеваемость составляла 350—500 миллионов случаев в год, из них 1,3—3 миллиона заканчивались смертью. Ожидалось, что смертность вырастет вдвое на протяжении следующих 20 лет.

По последним оценкам ВОЗ, в год происходит от 124 до 283 миллионов случаев заражения малярийными плазмодиями и от 367 до 755 тысяч смертей от заболевания.

[attention type=yellow]

С 2000 года по 2013 год глобальные показатели смертности от малярии снизились на 47 %, в Африканском регионе ВОЗ — на 54 %.

[/attention]

85—90 % случаев заражения приходится на районы Африки южнее Сахары, в подавляющем большинстве инфицируются дети в возрасте до 5 лет. 

Как можно заразиться?

Возбудителем малярии является малярийный плазмодий. Он относится к классу простейших. Причинными агентами могут являться 5 видов плазмодиев (хотя их в природе насчитывается более 60 видов):

  1. Plasmodium vivax — Возбудитель трёхдневной малярии. Около 20% мировых случаев. Болезнь названа так, потому что лихорадка, как правило, возникает через каждые 48 часов (например, 1 числа была лихорадка, 2 — выходной, 3 — снова симптомы). Это обуславливается сроками размножения плазмодия vivax внутри эритроцитов. Вначале заболевания температура держится постоянно, также приступы бывают и через день, и по два на дню. Длительность приступа около 1-2 часа. Средне-тяжелый вид плазмодиоза. Рецидив возможен после 3-5 лет;
  2. Plasmodium ovale — Аналогичен плазмодию vivax, вызывает трёхдневную малярию. Редкий вид;
  3. Plasmodium falciparum — Наиболее распространённый паразит, вызываемый около 80-85% случаев заболеваемости. Этот вид плазмодия вызывает самую тяжёлую форму заболевания — тропическую малярию. Заболевание развивается стремительно, часты случаи летального исхода, при неправильной диагностики и несвоевременном лечении. Часто протекает с осложнениями. Высокая смертность, практически все смертельные случаи малярии происходят при заражении этим плазмодием. Температура чаще постоянна, редко скачет. Большой набор симптомов характеризуется тем, что P. falciparum развивается в капиллярах внутренних органов, задерживая их кровоснабжение, что приводит к их патологии, и проявлению симптомов связанных с ними. Рецидив возможен после 1-2 лет от излечения;
  4. Plasmodium malariae — Возбудитель четырёхдневной малярии. Приступы происходят каждые 72 часа (1 — лихорадка, 2,3 — выходной, 4 — опять лихорадка), на четвёртый день. Длительность приступа 8-10 часов. Самый слабый и редкий вид малярии. Рецидив возможен после 10 и более лет;
  5. Plasmodium knowlesi — Новый вид малярии. Преимущественно заражает только макак, обитающих в Юго-Восточной Азии, но им также может быть инфицирован человек. В некоторых районах ЮВА около 70% случаев заражения. Безрецидивная форма малярии. Смертность низкая (2%).

В эндемичных странах часто наблюдается микст-инфекция. Она характеризуется одновременным заражением несколькими видами плазмодиев. При паразитологическом исследовании они выявляются в крови.

Жизненный цикл малярийных плазмодиев включает в себя последовательную смену нескольких стадий. При этом происходит смена хозяев. На стадии шизогонии возбудители находятся в организме человека.

Это стадия бесполого развития, её сменяет стадия спорогонии. Она характеризуется половым развитием и протекает в организме самки комара, который и является разносчиком инфекции.

Причинные комары относятся к роду Анофелес.

Проникновение малярийных плазмодиев в организм человека может происходить на разных стадиях разными путями:

  • При укусе комаром заражение происходит на спорозонтной стадии. Проникшие плазмодии через 15-45 минут оказываются в печени, где начинается их интенсивное размножение.
  • Проникновение плазмодиев эритроцитарного цикла на шизонтной стадии происходит непосредственно в кровь, минуя печень. Этот путь реализуется при введении донорской крови или при использовании нестерильных шприцев, которые могут быть заражены плазмодиями. На этой стадии развития он проникает от матери ребенку внутриутробно (вертикальный путь заражения). В этом заключается опасность малярии для беременных.

В типичных случаях деление плазмодиев, попавших в организм при укусе комара, происходит в печени. Их количество многократно увеличивается. В это время клинические проявления отсутствуют (инкубационный период). Длительность этой стадии различна в зависимости от вида возбудителя. Минимальная она у Р. Falciparum (от 6 до 8 суток) и максимальна у Р.malariae (14-16 суток).

Малярия на губах

Проявляется малярия на губах в виде небольших по размеру пузырьков, расположенных близко друг к другу и заполненных прозрачной жидкостью. Причиной возникновения на коже таких поражений является вирус простого герпеса первого типа. Поэтому использование термина «малярия» для обозначения данного явления не является корректным.

Также среди простонародных обозначений вируса герпеса на губах встречаются такие термины как «простуда» или «лихорадка на губах». Проявляется данное заболевание местными симптомами, которые развиваются в соответствии с определенной схемой. Кроме местных симптомов пациентов могут беспокоить и некоторые общие проявления этой болезни.

Симптомы малярии у человека

К характерным симптомам малярии относят повышение температуры, озноб, болезненность суставов, рвоту, снижение гемоглобина в крови, обнаружение гемоглобина в моче, судороги.

В некоторых случаях больные отмечают покалывание кожных покровов, этот симптом особенно часто встречается при малярии, вызванной P. Falciparum. При осмотре врач отмечает увеличение селезенки, больного беспокоит очень сильная головная боль, нарушается кровоснабжение головного мозга.

Малярия может заканчиваться летальным исходом, от нее сильнее всего страдают дети и беременные женщины.

Точный диагноз ставится после исследования крови на наличие возбудителей, для чего берутся два мазка – «толстая капля» и тонкий мазок. В капле можно проанализировать больший объем крови и поэтому этот анализ считается более чувствительным, однако он позволяет только выявить наличие плазмодия.

Для определения вида возбудителя необходим тонкий мазок, в котором паразита лучше видно. Точный диагноз микроскопическое исследование крови не всегда позволяет определить, так как в мазке незрелые формы различных видов возбудителя трудно отличить друг от друга.

При проведении анализа рекомендуется изучить несколько паразитов, которые проходят различные стадии созревания.

К современным методам исследования относятся специальные диагностические тесты, в основе которых лежат иммунохимические реакции. Такое исследование относится к наиболее быстрым (5–15 минут), точным и одновременно наиболее дорогим методам. 

Осложнения

У ослабленных, или нелеченных больных, а также при ошибках терапии могут развиться следующие осложнения:

  • малярийная кома;
  • отечный синдром;
  • обширные кровоизлияния (геморрагии);
  • разные варианты психозов;
  • почечная и печеночная недостаточность;
  • инфекционные осложнения;
  • разрыв селезенки.

Отдельным осложнением малярии следует отметить гемоглобинурийную лихорадку. Развивается она на фоне массивного размножения плазмодиев, при лечении медицинскими препаратами, вследствие разрушения эритроцитов (гемолиза).

В тяжелых случаях этого осложнения, к общим симптомам и жалобам приступа малярии добавляется прогрессирующее уменьшение образования мочи. Развивается молниеносная почечная недостаточность, часто с ранним летальным исходом.

Диагностика

При периодических приступах озноба и лихорадки без видимой причины всегда можно подозревать малярию, особенно в тех случаях, если больной посещал очаги малярии на протяжении последнего года или двух лет.

Типичным в диагностике малярии является обнаружение паразита в мазке и толстой капле. Необходимо идентифицировать вид возбудителя, так как от этого зависят лечение и прогноз.

Мазки крови повторяют через 4—6 часов, если первый мазок был отрицательным.

Толстая капля готовится растягиванием большой капли крови на 15 мм на стекле так, что клетки крови наслаиваются одна на другую. Мазок можно высушить. Проводится окраска по Гимзе или Райт— Гимзе. После окрашивания мазок может быть промыт буферным раствором и высушен на воздухе.

Так как эритроциты гемолизируются водой в нефиксированной толстой капле, паразиты выглядят как внеклеточные организмы на фоне стромы эритроцитов.

Использование тонких мазков, которые перед окраской фиксируются метанолом, — менее чувствительный метод, чем толстая капля, но прост в интерпретации.

[attention type=red]

Для диагностики Р.

[/attention]

falciparum можно применять непосредственно у постели больного тест-полоски с моноклональными антителами богатому к гистидином протеину-2, который обладает точностью, сопоставимой с кровяной каплей, и требует меньше усилий, чем микроскопия. Информативна ПЦР и другие пробы, но они широко не используются. Серологические тесты могут отражать предыдущее заражение, но не диагностируют острый процесс. [adsen]

Как лечить малярию?

Всех больных с малярией госпитализируют в инфекционный стационар.

Этиотропное лечение малярии:

  • «Хинин» — быстродействующий противомалярийный препарат,оказывающий влияние на все штаммы плазмодиев. Препарат вводят внутривенно капельно. Это необходимо для создания высокой концентрации лекарства в сыворотки крови. Длительность лечения «Хинином» составляет 7-10 дней. Если внутривенное введение лекарства становится невозможным, его вводят внутримышечно или перорально. Лечение одним «Хинином» часто бывает недостаточным. В таких случаях его прием совмещают с приемом антибиотиков из группы тетрациклинов или других противомалярийных средств.
  • «Хлоридин» представляет собой лекарственное средство, оказывающее повреждающее воздействие на различные формы плазмодиев. Этот препарат является довольно эффективным, но действует медленнее «Хингамина». В тяжелых случаях их рекомендуют принимать одновременно.
  • «Хингамин» — широко применяемое противомалярийное лекарственное средство, вызывающее гибель плазмодиев. Таблетки назначают больным малярией и используют для профилактики инфекции. Принимать их следует после еды в течение 5 дней. В тяжелых случаях препарат вводят внутривенно капельно. Детям «Хингамин» назначают в виде внутримышечных инъекций двукратно с интервалом в 6 часов. Чтобы ускорить и усилить терапевтический эффект препарата, его назначают вместе с противовоспалительными и гормональными средствами.

Кроме этиотропной терапии проводят симптоматическое и патогенетическое лечение, включающее дезинтоксикационные мероприятия, восстановление микроциркуляции, противоотечную терапию, борьбу с гипоксией.

Внутривенно вводят коллоидные, кристаллоидные, сложносолевые растворы, «Реополиглюкин», изотонический физиологический раствор, «Гемодез». Больным назначают «Фуросемид», «Маннитол», «Эуфиллин», проводят оксигенотерапию, гемосорбцию, гемодиализ.

Для лечения осложнений малярии используют глюкокортикостероиды – внутривенно «Преднизолон», «Дексаметазон». По показаниям переливают плазму или эритроцитарную массу.

Профилактика

Профилактика малярии требует приёма специальных таблеток. Начать их приём следует за 2 недели до предполагаемого выезда в зону риска. Прописать их может врач-инфекционист. Продолжать приём назначенных таблеток стоит и после приезда (в течение 1–2 недель).

Кроме этого, для профилактики распространения инфекции в странах, где недуг не редкость, проводятся мероприятия по уничтожению малярийных комаров. Окна зданий защищены специальными сетками. Если вы собрались ехать в такую опасную зону, стоит обзавестись специальной защитной одеждой и не забывать о приёме профилактических таблеток.

Такие меры профилактики практически полностью исключают заражение этой опасной болезнью. В том случае, если наблюдается хотя бы несколько симптомов из вышеописанных, следует незамедлительно обратиться к инфекционисту. Своевременно начатое лечение позволит практически полностью избавиться от заболевания и не допустить развития осложнений.

Разработка вакцин от малярии

Ведутся разработки и клинические испытания различных вакцин от малярии.

В июле 2015 года Европейское агентство лекарственных средств выпустило позитивное мнение на вакцину «Москирикс» (Mosquirix) от Plasmodium falciparum, также широко известную как «RTS,S/AS01», разработанную британской фармацевтической компанией GlaxoSmithKline и проверенную более чем на 15 тысячах детей. Вакцина показала эффективность около 30-40% при четырехкратном введении (в 0, 1, 2 и 20 месяцев).

Публикация европейского агентства поспособствует получению разрешений на применение в африканских странах.

Всемирная организация здравоохранения изучит, насколько безопасно использование вакцины детьми, которые наиболее подвержены этой болезни., применение вакцины в отдельных государствах ожидается в 2017 году.

Вакцина, вероятно, сможет стать дополнением к множеству мер, принимаемых для борьбы с малярией.

Источник: https://p-87.ru/m/malyariya/

Исследование на малярию

Окраска мазков на малярию

Малярия — одно из опаснейших паразитарных заболеваний на планете, ежегодно поражающее сотни миллионов человек. Люди должны понимать, как проводятся исследования на малярию, как распознать симптомы и когда обратиться за лечением. Ежегодно из сотен миллионов заразившихся сотни тысяч умирают, несмотря на то, что существует лекарство, заболевание поддается лечению.

Что такое малярия?

Малярия — опасное и очень заразное паразитарное заболевание, легко передающееся через укусы комаров рода анофелис и через кровь, например, при переливании. Недуг сопровождается повторяющимися приступами лихорадки, наиболее широко распространен в странах с влажным и жарким климатом.

После того как паразит попал в тело, он начинает размножаться, поражает клетки, разрушает их, лавинообразно наращивая свое присутствие. Посему решившие посетить жаркие тропические страны должны проявлять повышенную осторожность, и при наименьших подозрениях сдать анализ крови.

Заражению особенно подвержены:

  • люди с низким иммунитетом,
  • дети до 5 лет,
  • беременные женщины.

Виды плазмодий

Всего различают четыре различных вида малярии и четыре типа плазмодий, ее вызывающие:

  1. Plasmodium falciparum, что провоцирует тропическую лихорадку — одну из самих опасных и нуждающихся в срочном лечении разновидностей заболевания.
  2. Plasmodium vivax — провоцирует появление трехдневной малярии.
  3. Plasmodium malariae — является источником четырехдневной лихорадки.
  4. Plasmodium ovale — главная причина малярии овале (недуга вроде трехдневной).

Симптомы малярии

Главными (и самим очевидными) симптомами, проявляющимся при малярии, являются повторяющиеся с равными промежутками времени приступы лихорадки, повышение температуры и озноб. Длятся они несколько часов и сопровождаются такими признаками:

  • повышение температуры до 41 °C;
  • дрожь;
  • проявления кашля;
  • повышенная потливость (обычно сопровождает окончание приступа и снижение температуры).

Кроме того приступы могут сопровождаться такими явлениями как:

  • расстройства пищеварительной системы,
  • боль в разных частях тела, мышцах, голове,
  • повышенная утомляемость,
  • желтуха.

Хотя обычно симптомы при малярии проявляются спустя несколько недель после заражения, некоторые возбудители могут месяцами жить в организме незаметно. Во время острых приступов наблюдается тенденция к изменению состава крови, может возникать анемия, в особенности при тропической лихорадке. Возможно увеличение внутренних органов, например селезенки, но точную оценку может дать лишь врач.

Диагностические исследования малярии

Для точного диагноза необходимо сделать общий анализ крови и мочи.

При обнаружении вышеперечисленных симптомов необходимо срочно провести диагностику малярии.

Единственным основным способом диагностирования заболевания до сих пор остается непосредственное обнаружение плазмодиев в крови, которая берется у больного во время приступов. Самые распространенные способы анализа включают взятие крови на малярию методом толстой капли и мазка.

Обнаружив плазмодии, можно определить, серьезно ли болен человек, каким именно штаммом. Проводятся также общее исследование крови, обследование мочи, биохимические исследования на содержание билирубина или уровень альбумина.

Общий анализ крови

Поскольку паразит влияет непосредственно на кровь, из-за лихорадки в ее составе наблюдаются различные изменения. Таким образом, показано проведение общего обследования крови для выявления малярии. Лейкоцитоз, анемия, тромбоцитопения — вот лишь немногие возможные последствия болезни.

В общий анализ входят:

  • Сравнение уровня гемоглобина, а также эритроцитов — плазмодии влияют напрямую на кровяные тельца, разрушая их во время болезни.
  • Оценка показания уменьшения тромбоцитов — наблюдается у подавляющего большинства больных, является одним их характерных признаков малярии.
  • Проверка лимфоцитов — их уровень тоже может меняться во время болезни.

Другие анализы

Толстая капля на малярию – простой метод обнаружения заболевания.

Можно также выделить ряд других анализов крови, что могут обнаружить малярию:

  • Метод выявления антител к малярии — позволяет с помощью введения в организм плазмодия отслеживать реакцию иммунитета на него. Если итогом будет негативная реакция, это позволит исключить диагноз.
  • Метод выявления белков плазмодия является одним из новейших возможных анализов, позволяющих определять составные молекулы возбудителя. При сравнительной быстроте способ обладает неплохой точностью, а также небольшими финансовыми затратами для пациента.
  • Метод ПЦР, или полимеразная цепная реакция — непосредственно определяет генетический материал малярийного плазмодия. Проводя такой анализ крови можно определить точное число возбудителей, даже если оно небольшое. К сожалению, одним из недостатков является высокая стоимость процедуры.

Анализ толстой капли крови и мазка

Анализ мазка и толстой капли крови являются наиболее дешевыми и простыми методами обнаружения малярии. В то же время они требуют внимательности и значительных трудозатрат, а также исполнения ряда рекомендаций.

При необходимости обследовать более одного пациента необходимо подготовить инструментарий заранее. При тонком мазке кровь берут из безымянного либо среднего пальца на левой руке. При изготовлении мазка палец удерживается ранкой кверху.

Мазок крови — небольшой, его располагают в центре стекла.

Толстая капля отличается от мазка возможностью исследовать больший объем материала. Если обычные мазки крови— тоненькие, то капля, наносимая на стекло этим методом, имеет размер с монету. В итоге, исследуется в десятки раз больший объем крови.

В дальнейшем каплю подсушивают, и после окрашивания краской Романовского, промывания — исследуют.

[attention type=green]

Лучше, если анализы будет проводить опытный исследователь, ведь неподготовленный может принять за паразитов различные загрязнения или образования: бляшки Биццоцеро, обломки лейкоцитов, различные микроорганизмы, включая грибок или простейших, случайно попавших на образец.

[/attention]

Источник: http://InfoParazit.ru/bakterii-i-infektsii/issledovaniya-na-malyariyu.html

Бактериальные краски

Окраска мазков на малярию

7. Дифференцируют 4 мин в ацетатном буфере (рН 3,8).

8. Протирают концы предметных стекол, а затем осторожно удаляют избыток буферного раствора фильтровальной бумагой.

9. Заключают под покровное стекло в буферный раствор и оставляют на 2 мин. Препарат исследуют с помощью флюоресцентного микроскопа сразу либо, если мазок оставляют надолго, держат в темноте и парафинируют края покровного стекла. Флюоресценция сохраняется в течение 3 мес.

Результат: бактерии, дрожжи, грибы рода Candida окрашиваются в красный цвет, паразиты — в красный с желтыми ядрами; лейкоциты — ярко-зеленые.

Приготовление красителя

Готовый жидкий краситель перед окрашиванием мазков разводят из расчета 1-2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды. Мазки окрашивают 20 – 25 минут при 370 C во влажной камере (закрытая чашка Петри с увлажнённым фильтром на дне). После окрашивания мазки промывают в проточной воде, сушат на воздухе и исследуют при масляной иммерсии.

Красящую смесь Романовского-Гимзы в виде порошка (коммерческий краситель) растворяют в смеси равных объемов метилового спирта и глицерина (800 мг красителя на 100 мл растворителя).

Краситель растворяется плохо, поэтому лучше его растереть с растворителем в количестве 300 мг на 100 мл, а затем, помешивая, добавлять краситель до получения нужной концентрации. Приготовление красителя часто занимает несколько дней.

Важно в качестве растворителей использовать химически чистый метиловый спирт и глицерин, так как примеси ухудшают свойства красителя. Вместо метилового спирта можно применять 100 % этиловый спирт. Приготовленную красящую смесь хранят в сухом прохладном месте в плотно закрытом сосуде.

Методика окраски

1.

Мазки, фиксированные в метиловом спирте, окрашивают раствором (1 мл готовой жидкой краски + 2 мл основного буферного раствора + 47 мл дистиллированной воды) в течение 40—120 мин (продолжительность окрашивания подбирают эмпирически). Пользуются фосфатным буфером, но рН буфера зависит от вида мазка: для мазка костного мозга — 5,8 — 6,0, для мазка крови — 6,4 — 6,5, для выявления простейших — 6,8, малярийного плазмодия — 7,0 — 7,2.

2. Ополаскивают в дистиллированной воде, высушивают и исследуют при иммерсии.

Результат: бактерии окрашиваются в фиолетово-красный цвет, цитоплазма клеток — в голубой, ядра — в красный.

Окраска плазмодиев малярии в мазках по Романовскому-Гимза

Фиксация и методика окраски те же, что и для мазков крови. Для исследования на присутствие плазмоидиев, кроме мазков, берут обязательно и так называемую «толстую каплю». Последняя представляет собой каплю крови, размазанную по предметному стеклу углом другого стекла. «Толстую каплю» перед окраской не фиксируют.

Методика окраски «толстой капли»

1.

На высохшую каплю наливают краску Романовского-Гимза, разведенную как обычно. Продолжительность окрашивания 30-50 минут.

Вариант: нефиксированную толстую каплю сушат в течение 1 ч на воздухе и окрашивают 2—10 мин смесью из 4 мл раствора Гимзы, 3 мл ацетона, 2 мл буферного раствора (рН 6,5) и 31 мл дистиллированной воды.

[attention type=yellow]

2. Осторожно споласкивают в дистиллированной воде и затем просушивают в вертикальном положении (фильтровальную бумагу применять нельзя).

[/attention]

Препарат исследуют при иммерсии. Для сохранения препаратов можно закрыть толстую каплю покровным стеклом, которое кладут на водный раствор поливинилового спирта или раствор желатина.

Ввиду того, что гемоглобин в водных растворах краски выщелачивается, эритроциты в окрашенной капле не видны. Морфология паразита в толстой капле менее ясна, чем в мазке.

Результат. В мазках, окрашенных по Романовскому-Гимзе, отчетливо видна голубая протоплазма паразитов с ядром, окрашенным в розовый или красный цвет. Форма паразитов в зависимости от стадии развития может быть различной. В зрелых плазмодиях определяются темно-коричневые пигментные включения. Паразиты находятся в эритроцитах, но могут располагаться и свободно.

Дифференцированная окраска кислотоустойчивых бактерий (микобактерии туберкулеза и лепры)

Кислотоустойчивыми называют бактерии, которые после окрашивания фуксином не обесцвечиваются под действием концентрированных минеральных кислот и спиртов. Особенностью этой группы бактерий является их невосприимчивость к красителям, поэтому для их окрашивания применяют подогретые концентрированные красители. Наиболее распространен метод Циля-Нильсена.

Метод Френкеля

Окрашивают мазок с нагреванием на пламени горелки раствором фуксина иди генцианового фиолетового на анилиновой воде и затем обесцвечивают 1 —2 мин смесью (50 мл спирта + 20 мл 15 % азотной кислоты + 30 мл воды). В этой смеси растворяют до насыщения метиленовый синий или основной коричневый. Затем мазок промывают в проточной воде, сушат и изучают при иммерсии.

Результат: микобактерии окрашиваются в красный цвет (при окраске фуксином) или в фиолетовый (при окраске генциановым фиолетовым).

Флюоресцентное окрашивание мазков мокроты (метод Хагеманна) ,

Фиксированные нагреванием мазки окрашивают в течение 8 — 10 мин при комнатной температуре в растворе аурамина (1 г аурамина в 100 мл 5 % фенола).

Тщательно промывают проточной водой, дифференцируют в 2 сменах 2 % солянокислого спирта по 2 мин.

Затем снова хорошо промывают в проточной воде, обрабатывают 0,1 % раствором перманганата натрия 20 с, снова промывают в воде, сушат и исследуют при иммерсии (2 мл концентрированной соляной кислоты на 98 мл спирта).

Результат: микобактерий имеют вид ярко-жёлтых палочек.

Метод Киньуна (для срезов)

1. Депарафинированные срезы доводят до воды.

2. Окрашивают любым карбол-фуксином при 70 °С 10 мин, при 55 °С – 30 мин, при 37 °С – 2 мин или при 20-25 °С 4-16 мин.

3. Промывают в воде.

4. Обесцвечивают в смеси 2 мл концентрированной соляной кислоты и 98 мл 95 — 70 % спирта от 20 с до нескольких минут (до обесцвечивания).

5. Докрашивают кислым квасцовым гематоксилином 2 —5 мин или 1 % раствором метиленового синего либо януса зеленого В в 1 % уксусной кислоте и 20 % спирте 3 мин (два последних красителя пригодны и для мазков).

6. Промывают в проточной воде.

7. Обезвоживают, просветляют (не следует пользоваться карбол-ксилолом, который обесцвечивает почти все микобактерии) и заключают в полистирол, капрат целлюлозы или депекс, но не в бальзам.

Результат: кислотоустойчивые микробы и цероид окрашиваются в красный цвет, ядра клеток — в синий или зелёный, гранулы лаброцитов (тучных клеток) при окрашивании метиленовым синим приобретают синё-фиолетовый цвет, но не окрашиваются гематоксилином. В материале, фиксированном формалином, эритроциты часто окрашиваются в розовый цвет, а стержни волос и кератогиалин — в красный различных оттенков.

Метод Файта (для срезов)

1. Депарафинированные срезы доводят до воды и окрашивают 30 — 60 мин при комнатной температуре смесью, в состав которой входят 5 г фенола, 10 мл этилового или метилового спирта и 1 г основного фуксина (растворить и долить до 100 мл дистиллированной воды).

2. Переносят срезы в концентрированный раствор формалина на 5 мин.

3. Диференцируют почти до полного обесцвечивания в 2- % солянокислом спирте.

4. Переносят в концентрированный раствор формалина на несколько секунд и промывают в воде.

5. Докрашивают пикрофуксином Ван-Гизона и гематоксилином 10—15 мин, промывают в воде.

[attention type=red]

6. Дифференцируют и просветляют в спиртах возрастающей концентрации (от 95 % до 100 %), спирт-ксилоле и двух сменах ксилола, заключают в полистирол или пермаунт.

[/attention]

Результат: кислотоустойчивые микобактерии окрашиваются в фиолетовый цвет.

Серебрение бактерий в мазках — метод Фонтана

1.

Мазки, фиксированные нагреванием (или в парах формалина, спирте, формоловых смесях, жидкости Карнуа), ополаскивают в воде.

2. Нагревают 10 мин в растворе Люголя до появления паров, просветляют 2 мин в 5 % растворе тиосульфата натрия.

3. Ополаскивают дистиллированной водой 30 с.

4. Нагревают до появления паров в растворе аммиачного серебра 30 с.

5. Промывают в дистиллированной воде, высушивают и заключают в бальзам.

Метод Леффлера

1. Мазок кладут на 0,5—1 мин в слегка нагретую протраву (100 мл 12 % водного раствора танина + 50 мл насыщенного на холоде раствора сульфата железа + 50 мл спиртового раствора фуксина).

2. Хорошо промывают мазок водой и ополаскивают в спирте.

3. Окрашивают насыщенным раствором фуксина в анилиновой воде, к которому по каплям добавляют 1 % гидроксида нутрия до тех пор, пока раствор не станет мутным и не начнет выпадать, осадок красителя. Раствор красителя наливают на часовое стекло, мазок пускают плавать, подогревая краситель на спиртовке до появления паров. Окрашивают в течение 1—2 мин.

4. Промывают в воде, сушат и исследуют при иммерсии или заключают в бальзам.

Метод Лайфзона

Смешивают равные объемы 1,5 % хлорида натрия, 3 % таниновой кислоты и 0,9 г парарозанилина ацетата + 0,3 г парарозанилина гидрохлорида + 100 мл 96 % спирта. Хорошо размешивают, рН смеси должен быть от 4,8 до 5,2. При комнатной температуре краску можно хранить несколько дней, при 4 °С  –  до 2 мес., а при минус 10 °С — неопределенно долго.

Мазки с культур или из жидкостей не фиксируют на огне, можно пользоваться другими методами фиксации.

Метод Клетта

Мазки окрашивают разбавленным в 10 раз насыщенным спиртовым раствором метиленового синего, подогревая краску на огне до кипения. Затем промывают в воде и окрашивают в течение 5 с 10 % спиртовым раствором фуксина, разбавленным водой в 10 раз. Промывают водой, сушат и изучают при масляной иммерсии.

Результат: бактерии окрашиваются в синий цвету а их капсулы — в красный.

Метод Джоне

Фиксированные над огнем мазки окрашивают при подогревании до появления паров в течение 2 мин 20 % водным раствором генцианового фиолетового. Затем промывают в воде и окунают на 8—10 с в 2 % раствор уксусной кислоты. Далее снова промывают водой, сушат и изучают при масляной иммерсии.

Результат: бактерии темно-синие, капсулы светло-синие.

Метод Фридлендера (для срезов)

Депарафинированные срезы окрашивают в течение нескольких часов смесью 5 частей насыщенного спиртового раствора генцианового фиолетового, 10 частей дистиллированной воды и 1 части ледяной уксусной кислоты (срезы можно оставить на ночь). Дифференцируют окраску 10—15 с 0,1 % растворе уксусной кислоты. Промывают срез водой, быстро обезвоживают в спиртах, проводят через ксилол и заключают в бальзам.

Результат: бактерии темно-синие, капсулы светло-синие.

Метод Бурри

На конец предметного стекла наносят каплю туши и петлёй — исследуемый материал. Смесь тщательно перемешивают петлей, делают мазок и высушивают его, не фиксируя. Исследуют при масляной иммерсии.

Результат: фон препарата окрашен в дымчато-темный цвет, на котором хорошо видны бесцветные микробные тела и их капсулы.

Метод Гинса

Негативно окрашенный препарат, приготовленный по методу Бурри, фиксируют любым способом, промывают водой и окрашивают карболовым фуксином, разведенным в соотношении 1:3. Промывают водой, высушивают и изучают при иммерсии.

Выявление спор бактерий

Окрашивание спор удается только в мазках.

Метод Вайсера—Хьюппе

1. Мазки окрашивают в растворе карболового фуксина или фуксина на анилиновой воде в термостате при 37 °С в закрытой посуде в течение нескольких часов.

2. Обесцвечивают 2,5 % раствором серной кислоты в течение 3 — 5 с и споласкивают 96 % спиртом, пока не перестанут отходить облачка красителя.

3. Докрашивают метиленовым синим 3 — 5 мин.

4. Ополаскивают в проточной воде, сушат на воздухе и изучают при масляной иммерсии.

Можно окрашивать карболовым фуксином, подогревая на огне мазок с красителем до появления паров 5 — 8 мин, но тогда дифференцировать следует 2,5 % серной кислотой в течение 10-20 сек.

Источник: https://student.zoomru.ru/veterinar/bakterialnye-kraski/144599.1107443.s2.html

Лабораторные методы диагностики малярии

Окраска мазков на малярию

Диагностика малярии основана на данных клинических проявлений, эпидемиологического расследования и лабораторных методах исследования, включающих методики выявления паразитов, их количества, видовую принадлежность и обнаружение антител в организме исследуемого. Обследованию в первую очередь подлежат пациенты из группы риска — прибывшие из эндемичных по малярии регионов, лихорадка у которых появилась в первые два года после выезда из этих регионов.

Рис. 1. Забор крови для приготовления препарата «толстая капля».

Рис. 2. Окраска и вид препаратов «толстая капля» и тонкий мазок.

Диагностика малярии с использованием микроскопического метода

Микроскопия препарата «толстая капля» и тонкого мазка, позволяющая обнаружить паразитов, их количество и видовую принадлежность, является ведущим методом диагностики малярии. Она проводится при малейшем подозрении на это заболевание, независимо от температурной реакции пациента.

Для определения видовой принадлежности паразитов и стадии заболевания используется тонкий мазок крови. В толстой капле локализуется больше паразитов, чем в мазке. Этот метод диагностики превосходит методику определения наличия возбудителей малярии в тонком мазке крови в 20 — 40 раз.

В периферической крови паразиты обнаруживаются через определенное время после заражения:

  • при 3-х дневной малярии — через 8 — 12 дней,
  • при тропической — от пяти с половиной дней до 12,
  • при 4-х дневной — через 15 — 21 день,
  • при малярии, подобной 3-х дневной — через 9 — 15 дней.

Паразиты в крови присутствуют как во время лихорадочного приступа, так и в межприступный период и при паразитоносительстве.

Рис. 3. Техника приготовления тонкого мазка.

Техника приготовления «толстой» капли

Полученная при проколе пальца капля крови наносится на предварительно очищенное и сухое предметное стекло и размазывается до получения пятна 1 см в диаметре.

После подсушивания на воздухе предметное стекло заливается краской Романовского—Гимзы.

По истечении 40-минутной экспозиции препарат ополаскивается под проточной водой и подсушивается при комнатной температуре, установленный в вертикальное положение.

Под микроскопом исследуется не менее 100 полей зрения. Более эффективным считается исследование 2-х толстых капель в течение 2,5 минут, чем 1-й капли в течение 5-и минут. 100 полей зрения просматриваются даже в том случае, когда малярийные плазмодии выявились уже в первых полях. Это производится для того, чтобы не пропустить микст-инфекцию.

Рис. 4. Микроскопия препарата «толстая капля» и тонкого мазка является ведущим методом диагностики малярии.

Порог обнаружения паразитов

Порогом обнаружения малярийных плазмодиев называется минимальная концентрация возбудителей, которую возможно выявить при микроскопировании препарата «толстая капля». При заболевании этот показатель составляет 5 паразитов в одном микролитре крови. При просмотре 100 полей зрения обследуется 0,2 мкл крови.

При наличии косвенных признаков малярии (пребывание в эндемичных зонах, гипохромная анемия, обнаружение пигмента в моноцитах) и отрицательных результатов исследования препаратов «толстая капля», исследование вновь повторяется более тщательно, и не одно, а серия, состоящая из 4 — 6 препаратов при одном уколе, либо полученных при заборе крови, который производится 4 — 6 раз в сутки в течение 2 — 3 дней.

Интенсивность паразитемии определяется знаком «+».

  • 1 (+) обозначает выявление от 1 до 100 паразитов в 10 п/зр, что соответствует 5 — 50 плазмодиям в одном мкл крови;
  • 2 (+) обозначает выявление от 10 до 100 паразитов в 10 п/зр, что соответствует 50 — 500 плазмодиям в одном мкл крови;
  • 3 (+) обозначает выявление от 1 до 10 паразитов в 1 п/зр, что соответствует 500 — 5000 плазмодиям в одном мкл крови;
  • 4 (+) обозначает выявление от 10 до 100 паразитов в 1 п/зр, что соответствует 5000 — 50000 плазмодиям в одном мкл крови;
  • 5 (+) обозначает выявление более 100 паразитов в 1 п/зр, что соответствует более 50000 плазмодиям в одном мкл крови.

Интенсивность паразитемии можно вычислить по количеству паразитов на 100 эритроцитов в 10 полях зрения, либо по соотношению числа паразитов и лейкоцитов в 1 мкл крови.

По интенсивности паразитемии определяется прогноз при тропической малярии. При других видах заболевания более 2% эритроцитов не поражается.

Формы малярийных плазмодиев в разные фазы развития

В препарате крови «толстая капля» возможно определить плазмодии малярии, находящиеся на разных стадиях развития — трофозоида, кольца, шизонта, морулы, и гаметы.

Рис. 5. Plasmodium ovale имеет округлую форму.

Рис. 6. Молодой трофозоит Plasmodium vivax в эритроците.

Рис. 7. Юные трофозоиды Plasmodium falciparum.

Рис. 8. Кольцевидные трофозоиты Plasmodium vivax.

Рис. 9. Амебовидные шизонты Plasmodium vivax.

Рис. 10. Зрелые шизонты Plasmodium vivax.

Рис. 11. Женские гаметоциты возбудителей тропической малярии.

Рис. 12. Гаметоциты плазмодий тропической малярии имеют полулунную форму, плазмодии других видов заболевания — округлую.

Рис. 13. В процессе роста в цитоплазме паразитов накапливается пигмент. На фото Р. vivax.

Контроль эффективности лечения

При адекватном лечении малярии уровень паразитемии в течение суток снижается на 25% и более, а через 3 суток от начала лечения он должен составлять не более 25% от исходного. В случае обнаружения паразитов на 4-е сутки от начала лечения свидетельствует о развитии лекарственной резистентности возбудителей.

Кратность проведения исследования

При выявлении малярии микроскопическое исследование препаратов крови проводится ежедневно. При тяжелой форме тропической малярии микроскопия проводится 2 раза в день до исчезновения возбудителей в крови и далее еженедельно до 28 дня лечения с целью оценки его эффективности и выявления резистентности к противомалярийным препаратам.

Рис. 14. Эритроциты при инфицировании P. vivax и P. ovale увеличиваются, обесцвечиваются и деформируются, в них появляется токсическая зернистость.

При инфицировании P. malariae и P. falciparum форма и размеры эритроцитов не изменяется. На фото деформированные эритроциты больного малярией (микрофотография в сканирующем микроскопе).

Иммунологические методы диагностики малярии

С помощью серодиагностики малярии возможно выявить в сыворотке крови пациента антитела и растворимые паразитарные антигены.

Серологические реакции показаны к применению в случаях появления у больных лихорадки неясного генеза, гепатоспланомегалии, анемии, а также для исследования крови донора — предполагаемого источника инфекции.

Серологические реакции применяются при эпидемиологическом наблюдении за лицами, проживающими в неблагополучных по малярии в прошлом территориях.

Чаще всего при диагностике малярии применяется НРИФ — непрямая реакция иммунофлуоресценции. Используются так же ИФА, РИГА и др. Внедряется в практику использование реакции энзим-меченых антител (РЭМА).

В случаях очень низкой паразитемии показано применение ПЦР (полимеразной цепной реакции). Дороговизна и сложность применения данной методики не позволяет широко ее использовать.

Разработаны новые методы диагностики малярии — экспрессного микроскопического анализа препаратов крови с использованием флюоресцирующих красителей, позволяющие в течение двух минут выявить паразитов тропической малярии, количество которых более 60 в 1 мкл гемолизированой крови.

[attention type=green]

При малярии антитела появляются на 8 — 27 день паразитемии. Первыми появляются антитела IgM, затем — антитела IgG. Антитела после перенесенной малярии и успешного излечения могут длительно сохраняться в крови человека — от 0,5 до 2 и даже 20 лет.

[/attention]

Рис. 15. Чаще всего при диагностике малярии применяется НРИФ — непрямая реакция иммунофлуоресценции.

Дифференциальная диагностика малярии

Малярию следует отличать от гриппа и других ОРВИ, кишечных инфекций, лептоспироза, желтой лихорадки, злокачественных форм вирусных гепатитов, тифо-паратифозных заболеваний, сепсиса, бруцеллеза, сепсиса, геморрагических лихорадок, заболеваний крови.

При коматозном состоянии малярию следует отличать от эпидемического цереброспинального менингита, уремической, печеночной и диабетической комы.

Иногда малярию следует дифференцировать с холециститом, холангитом, абсцессом печени, пиелонефритом и лимфогранулематозом.

Рис. 16. Рутинное исследование препарата «толстая капля» в регионах эндемичных по малярии.

 

ССЫЛКИ ПО ТЕМЕ

Статьи раздела “Малярия”Самое популярное  

Источник: https://microbak.ru/infekcionnye-zabolevaniya/malyariya/diagnostika-malyarii.html

Вопрос 61. Лабораторная диагностика малярии

Окраска мазков на малярию

/.Обнаружениеплазмодиев в толстой капле и мазке крови

4. Исследование комаров на зараженность малярийными паразитами

1.Паразитологическийдиагноз малярии основаннаобнаружении паразитов в окрашенныхпрепаратах (толстаякапля и мазок)крови.Паразитымогут присутствовать в крови не тольково время лихорадочных приступов ипромежутков между присту­пами,следующими один за другим, но и в течениедлительных периодов, на протяжениикоторых не наблюдается повышениятемпературы.

Наличиепаразитов в крови при отсутствиилихорадочных при­ступов называетсяпаразитоносительством.Такиелюди зараз­ны для комаров. При массовыхобследованиях следует брать кровь внезависимости от наличия приступов.Техникаприготовления и окраски мазка —мазок готовят как обычно.

После тогокак мазок высохнет, его фиксируют в96%-ном этиловом спирте 15 мин или вметиловом спирте в течение 3 мин.Высушенные после фиксации мазкиокраши­вают краской Романовского,разведенной дистиллированной водой,ркрашивают втечение30—50 мин, в зависимости от качествакраски.

После окрашивания препаратсполаскивают водой и высушивают навоздухе.

Техникаприготовления и окраски толстой капли.Настекле при­готовляют мазок, а потомна еще влажный мазок дают упасть каплекрови. Капля равномерно растекается,образуя круг. По­сле того как каплявысохнет, на мазке простым карандашомделают соответствующую отметку. Препаратбез фиксации ок­рашивают.

Затемосторожно (чтобы не смыть каплю) препаратсполаскивают водопроводной водой ивысушивают. Мазки и толстые каплимикроскопируют имммерсионной системой.2.Морфология малярийных паразитов в мазкекрови. Мерозоит,внедрившись вэритроцит,превращается в молодой шизонт, имеющийвид кольца.

[attention type=yellow]

Затем паразит, увеличиваясь,принимает амебовидную форму, при этомсохраняется просвет (вакуоль) междуядром паразита и основной частью егоцитоплазмы. В цитоплазме паразитапоявляются зерна пигмента.

[/attention]

Амебовид­ныйшизонт заполняет значительную частьэритроцита, затем начинает округляться,вакуоль исчезает (стадия подготовки кделению), пигмент начинает собиратьсяв отдельные пучки. Дляплазмодия малярии шизонты— лентовидные формы.

Ядро паразитаначинает делиться, а затем цитоплазмапаразита де­лится так, что к каждомудочернему ядру прилегает отдельныйкомочек цитоплазмы (меруляция). В результате получается кучка мерозоитов— морула.Пигментна стадии морулы собран воднукомпактную кучу.

У пл.фальсипарум скучиваниепигмента наступает еще до пол­ногоформирования морулы. Мерозоиты расходятся,попадают в плазму крови, часть из нихпогибает, часть внедряется в но­выеэритроциты.

Гамонты.Формагамонтов у всех малярийных паразитов,за исключением тропической малярии,круглая или слегка оваль­ная. Притропической малярии плазмодий имеетвытянутые гамонты с закругленнымиконцами.

Мужские и женские гамон­тыразличаются между собой по величине иструктуре ядра (интенсивности окраскицитоплазмы). Женские гамонты — яд­ронебольшое, компактное; цитоплазмакрасится в интенсив­ный голубой цвет.

Мужские гамонты — ядро большое,цито­плазма красится бледно, частозона вокруг ядра принимает фиолетовыйоттенок.

Морфологиямалярийных паразитов в толстой капле.Втолстой капле, поскольку ее окрашиваютв нефиксированном виде, эритроцитывыщелачиваются, а малярийные паразитыпретер­певают значительную деформацию.

При четырехдневной и тропической маляриипораженные эритроциты в толстой каплевыщелачиваются полностью, так же как инормальные. При трехдневной малярии втолстой капле строма эритроцитовсо­храняется и диагностика малярийногопаразита по толстой ка­пле облегчается.

Кольца в толстой капле обычно смяты,вытя­нуты в виде восклицательногознака, иногда разорваны в виде запятой.Амебовидные шизонты часто бываютуплотненными, лентовидные шизонтычетырехдневной малярии в толстой ка­плеокругляются и неотличимы от амебовидныхшизонтов. Морулы распознаются в толстойкапле легко.

Цитоплазма паразитов врезультате воздействия химиотерапев-тическихпрепаратов окрашивается слабее,приобретает стекло­видный оттенок,становится вакуолизированной, распадаетсяна отдельные комочки, ядро становитсярыхлым или, наоборот, более компактным.

Иногда пигмент собирается в кучки,вы­талкивает из паразита. В толстыхкаплях распознавание таких подвергшихсядеформации паразитов становится болеетруд­ным, а иногда и невозможным.

Серологическаядиагностика малярии включаетиммунофер-ментную агглютинацию, реакциюнепрямой гемагглютинации и др., которыеимеют наибольшее значение в неэндемичныхрайонах.

3. В мазках крови и толстых каплях малярийныепаразиты могут быть приняты за мерозоит,скопление бляшек может симули­роватьморулу.

В препаратах, окрашенных поРомановскому,бляшкиотличаются от мерозоитов по следующимпризнакам: мерозоитсостоит из красного ядра и голубойцитоплазмы.

Фон бляшки в мазке иногдаокрашивается в бледно-голубой цвет,однако ее зернистость принимает красныйцвет более светлого оттенка, чем у ядермерозоитов.

[attention type=red]

Впрепаратах могут быть обнаружены такжепосторонниемик­роорганизмы, по форме напоминающиемалярийных паразитов: грибки,одноклеточные водоросли, свободноживущиепростей­шие.

[/attention]

Некоторые одноклеточныеформы с компактным ядром в центре,окрашивающимся поРомановскому вярко-красный цвет, симулируют гамонтытропической малярии. Их легко от-, лйчитьпо отсутствию пигмента.

Свободноживущиепростей­шие с одним или несколькимижгутами могут быть приняты за стадиюобразования мужских гамет малярийногопаразита.

4.Комароввскрывают и определяют наличиеооцист на желудке и спорозоитов в слюнныхжелезах. Ооцистывидны в нативных препаратах.

Незрелыеооцисты выглядят в таких препаратахкак круглые гомогенные образования спигментом, состоящим из несколь­кихглыбок.

В зрелыхооцистах видны хорошо сформировавшиесяспоро-зоиты, тесно прилегающие друг кдругу. Ряды спорозоитов в виде частоколарасполагаются по отношению друг к другупод разными углами, в результате чегоооциста приобретает моза­ичный вид,при надавливании покровного стекла изооцист выходят спорозоиты.

Вслюнных железах спорозоиты расположенырядами перпен­дикулярно к протокуслюнных желез, а также в виде конгло­мератов.В секрете слюнных желез спорозоитыпопадают в ок­ружающую жидкость, вкоторой хорошо заметны вследствие ихподвижности.

Источник: https://studfile.net/preview/1473768/page:57/

Лечимся дома
Добавить комментарий

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!: